ELISA試劑盒實驗的整個過程

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ELISA試劑盒操作過程：1.規(guī)范品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)規(guī)范品孔10孔，在榜首、第二孔平別離加規(guī)范品100μl，然后在榜首、第二孔中加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻；然后從榜首孔、第二孔中各取100μl別離加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔別離加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl別離加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔平別離加規(guī)范品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl別離加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔平別離加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔平別離取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔別離加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度別離為24ng/L，16ng/L ，8ng/L，4ng/L，2ng/L）。

2.加樣：別離設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其他各步操作一樣）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動混勻。3.ELISA試劑盒溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗刷液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗刷：當心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶：每孔參加酶標試劑50μl，空白孔在外。7.溫育：操作同3。8.洗刷：操作同5。9.顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此刻藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.ELISA試劑盒測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進行。